酵素生産と機能解析

微生物による酵素生産

  実習データ(顕微鏡写真)

data(圧縮版 *.zip)は下記からダウンロードしてください。

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    ゲルろ過による精製

      後日掲載予定

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    SDS-PAGEによる精製度確認

      後日掲載

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    動力学・酵素の結晶化

      

      結晶化実験: 後日掲載


    動力学実験に関しては下記参照のこと

    レポート作成に役立つ動力学補足資料を掲載しました。

    ☆【R言語(R)を用いてミカエリス・メンテンの式をフィッティングする方法】

    エクセルでは非線形の回帰分析ができないので、R言語(R)でミカエリス・メンテンの式をフィッティングする方法を紹介します。

    Rのnlsを使います。詳しくは以下のQiitaの記事を参照のこと

    https://qiita.com/hnishi/items/2a8a7e70aa8223b99f15

    1. Rのインストール

    以下のURLから各自のOSに合わせた実行環境をダウンロードしてインストールしてください。

    https://cran.ism.ac.jp

    2. データの準備

    テキストエディット(mac)かメモ帳(? Windows)を使って以下のように実験データを入力して、セーブして下さい。ファイルの拡張子は.csvで(例:data.csv)。

    エクセルで入力したものをcsv形式でセーブしてもいいです。

    最後の行に改行が入っていないとエラーが出るかもしれません。

    S ,v

    5.0, 0.048

    2.5, 0.044

    1.25, 0.040

    0.625, 0.034

    0.3125, 0.027

    3. プロットの表示

    以下のスクリプトの、KminitとVmaxinit(KmとVmaxの初期値)を書き換えた後(予想されるKmとVmaxに近い値を使う)、Rのコンソールにコピーandペーストする。

    ファイル選択のダイアログが出てくるので、先ほど保存したcsvファイルを読み込む(うまくいけば、プロットが表示される)。

    注意:このプロットでは、Sとv、KmとVmaxには、あえて単位を書いていません。レポートを提出するときには、必ず、適切な単位を書き加えること!!

    Kminit <- 0.2

    Vmaxinit <- 0.05

    MM.df <- read.csv(file.choose())

    plot (MM.df,xlim=c(0,max(MM.df[,1])),ylim=c(0,max(MM.df[,-1])*1.1))

    MM.nls <- nls(v ~ (Vmax * S / (Km + S)), data=MM.df, start=list(Km=Kminit, Vmax=Vmaxinit))

    Km <- unname(coef(MM.nls)["Km"])

    Vmax <- unname(coef(MM.nls)["Vmax"])

    curve(Vmax*x/(Km+x),0,max(MM.df$S),add=TRUE)

    mtext(paste("Km = ",signif(Km,digits=3),"+/-",signif(summary(MM.nls)$parameters[1,2],digits=3)," , Vmax = ",signif(Vmax,digits=3),"+/-",signif(summary(MM.nls)$parameters[2,2],digits=3)),side=3)


    下記 Rに入力するスクリプトとプロット例です。

  • Rスクリプト ( text 1 kB)
  • プロット例 ( pdf 94 kB)
  • 以下の論文の電子付録(supplementary material)のエクセルファイルでも同様の計算を行うことができる。

    Automatic Calculation of the Kinetic Parameters of Enzymatic Reactions with Their Standard Errors Using Microsoft Excel.

    Motomitsu Kitaoka. J. Appl. Glycosci.70 (1), 33-37, 2023.

    https://doi.org/10.5458/jag.jag.JAG-2022_0012

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    構造・機能の insilico 解析

      後日掲載予定

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    微生物の大量培養

      後日掲載予定

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    レポート提出

      2024年5月29日(水)  24時 

    提出先 UTOL




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