リアルタイムPCRセミナー

第6回　東京大学遺伝子実験施設テクニカルセミナー

siRNAを用いた解析手法からリアルタイムPCRでの検証方法

ノックダウンから定量実験まで

日時　平成19年5月23日　午後3時～4時

場所　東京大学理学部1号館2階201A講義室
　　　（http://www.u-tokyo.ac.jp/campusmap/cam01_06_01_j.html）

演者　アプライドバイオシステムズ社 セミナー担当

＜第一部＞siRNAを用いた解析手法のご紹介 (30分)

① siRNAの基礎

② リバーストランスフェクション法とエレクトロポレーション

③ siRNAライブラリーを用いた解析法

④ Pooled siRNA vs individual siRNA

⑤ In vivo実験を行う上の予備実験の重要性

＜第二部＞リアルタイムPCRを用いた解析手法のご紹介（60分）

①リアルタイムPCRの基本的メカニズムと応用例　

・定量原理

・正確な測定を可能とするメカニズム

・応用例の紹介（siRNAの効果確認を含む応用例紹介）

・検量線を用いない相対定量方法（ΔΔC_T法）の紹介

②リアルタイムPCRを用いた定量手順と実験上の留意点　

a) サンプル調整（RNA抽出からcDNA合成まで）

b）プライマー・プローブ設計の重要性

・実験系の構築やゲノムDNAの混入を回避する設計

・スプライシングバリアントに着目した遺伝子発現解析

c）遺伝子発現解析における内在性コントロールの選択の重要性

など